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服務簡介

酵母表達系統是一種最經濟高效的真核蛋白表達系統,可以成功實現胞內表達或是分泌表達,且其放大培養基相對廉價,培養條件要求不高,適宜工業放大。與哺乳動物細胞表達系統一樣,酵母蛋白表達系統能夠對所表達蛋白進行例如糖基化、?;?、脂基化、磷酸基化等保證蛋白天然構象的修飾,可用于制備非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料。

武漢金開瑞生物工程有限公司的酵母蛋白表達平臺由多年從事酵母表達操作的實驗人員組成,經驗豐富,采用自行改造的高效分泌載體和宿主組合,可在最大程度上實現最高質量的蛋白表達。經客戶反饋,以我平臺所制備的蛋白原料為抗原所制備的單抗均具有很好的識別天然蛋白的優良特性。

點擊這里查看如何選擇合適的蛋白表達系統

服務流程
方案溝通
 
接收訂單
 
質粒構建
 
蛋白表達
 
蛋白純化
 
成果交付
客戶提供

目的蛋白信息或基因序列,質粒(也可以選擇由金開瑞提供);

蛋白詢價信息表(請點擊下載中心,下載蛋白詢價信息表后詳細填寫)。

最終交付

純化后蛋白純品、表達菌株(收費);

蛋白表達結題報告,包括測序報告、實驗條件、蛋白表達純化檢測結果。

服務說明
服務名稱 服務項目 服務內容 交付結果 服務周期
酵母細胞表達服務經濟型套餐 原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
PCR擴增產物酶切連接到合適的載體
轉化DH5α
重組質粒大量制備
線性化重組質粒
優化表達 電轉化適宜的酵母宿主 酵母核酸電泳圖 2-3周
隨機挑10株單菌落進行PCR鑒定
表達及純化 從PCR鑒定陽性菌落中選取一株做1L體系的放大表達 最終純化產物SDS-PAGE及WB 1-2周
發酵液上清處理及一步純化
純化產物SDS-PAGE及Western Blot 1 L上清的純化產物
酵母細胞表達服務標準型套餐 原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
PCR擴增產物酶切連接到合適的載體
轉化DH5α
重組質粒大量制備
線性化重組質粒
優化表達 電轉化適宜的酵母宿主 酵母核酸電泳圖 5-6周
用遺傳霉素G418進行多拷貝子篩選
對多拷貝子克隆進行RCR鑒定
選取40株多拷貝子進行小量誘導表達 最終種子表達上清SDS-PAGE圖
表達及純化 選取表達情況最好的,根據客戶需要放大表達 最終純化產物SDS-PAGE及WB 1-2周
發酵液上清處理及一步純化
純化產物SDS-PAGE及WB 1L上清的純化產物
Biobrick專利技術用于酵母工業菌種改良優化 原核克隆 基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
PCR擴增產物酶切連接到合適的載體
轉化DH5α
重組質粒大量制備
Biobrick專利技術體外梯度構建多拷貝基因劑量
優化表達 線性化重組質粒 酵母核酸電泳圖 5-6周
電轉化適宜的酵母宿主
對多拷貝子克隆進行RCR鑒定
選取40株多拷貝子進行小量誘導表達 最終種子表達上清SDS-PAGE圖
表達及純化 選取表達情況最好的,根據客戶需要放大表達 最終純化產物SDS-PAGE及WB 1-2周
發酵液上清處理及一步純化
純化產物SDS-PAGE及WB 客戶要求的蛋白表達量
案例展示

案例1:經濟型套餐

以下是通過我平臺自行改造的pPIC9K載體和GS115宿主系統成功表達一種酶的經濟型套餐實例。自接到訂單至成功表達只用了20個工作日,親和層析一步純化得到蛋白純度在95%以上。

Fig. A: Expression and secretion of enzyme protein from P.pastoris
Lane 1: Total protein of recombinant clone
Fig. B: Purification of the target enzyme protein
Lane 1: Purified enzyme protein

案例2:標準型套餐

以下是一個需要做優化表達的標準型訂單服務,客戶要求表達一種藥用蛋白,最后做工藝放大,對表達量有一定的要求,客戶自己做了大量的工作仍未提高表達量,我們從上游開始進行表達優化,歷經50個工作日,用我平臺自己改造的pPIC9K載體和KM71H宿主在2.5 mg/mL的G418濃度下獲得一株令客戶滿意的工藝放大種子。

Fig C: Expression and secretion of pharmaceutical protein from P.pastoris
Lane 1: Expression level from customer
Lane 2: Expression level from Genecreate
Lane 3: Negative control
Fig. D: Purification of the target pharmaceutical protein by SP-Sepharose
Lane 1: Purified enzyme protein

案例3:

以下是我平臺成功完成的一個工業酶菌種對產量的優化提高工作,利用Biobrick專利技術由單拷貝基因劑量構建到8拷貝的基因劑量,歷經近60個工作日,將酶的表達量由開始的0.5 g/L的水平提高到2.4 g/L的水平,提高了近5倍。

Fig. E: single copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris
Lane 1: Expression level from single copy gene expression
Fig. F: eight copy gene expression of industrial enzyme from P.pastoris
Lane 1: Expression level from eight copy gene expression

備注:我們只提供抗HIS標簽抗體用于表達產物的質控,客戶要求用對應蛋白的抗體做western blot,則抗體由客戶自行提供。

專利的Biobrick技術是集蛋白的高效表達和高活性于一體的新技術,以下是我們成功為一家知名公司開發的診斷試劑原料,經客戶同意,我們公開下列數據:

N1 122 P1 19523 S1 266
N2 110 P2 22049 S2 4474
N3 231 P3 22342 S3 11371
N4 187 P4 22918 S4 24228
N5 105 P5 24117 S5 25865
N6 162 P6 23920 S6 26194
N7 128 P7 20396 CV1 25762
N8 129 P8 23952 CV2 25385
N9 111 P9 24398 CV3 26122
N10 136 P10 25177 CV4 25314
N11 196 P11 24194 CV5 24917
N12 172 P12 24018 CV6 26138
N13 220 P13 24922 CV7 25599
N14 139 P14 24965 CV8 26105
N15 201 P15 24959 CV9 25444
N16 176 P16 25123 CV10 26237
N17 528 P17 25811 CV 1.72%
N18 322 P18 25534    
N19 157 P19 23840    
N20 304 P20 24188    

備注:以上是利用化學發光平臺開發的試劑盒過SFDA的panel結果:

其線性相關性如下:

如何訂購

1. 郵件訂購:請點擊此處下載“重組蛋白項目信息咨詢單”,詳細填寫信息后,發送至郵箱[email protected]。

2. 在線咨詢:點擊屏幕右側“在線咨詢”,或撥打咨詢電話027-62431110,我們會盡快安排工作人員與您聯系!

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